ATCC細胞實驗用品

材料：貼壁培養的細胞

器材：24孔培養孔板、吸管、膠帽、離心管、培養皿、半對數坐標紙、蓋玻片、細胞計數板、酒精棉球、酒精燈、離心機、倒置顯微鏡、普通光學顯微鏡、超凈工作臺、CO2培養箱

試劑：Hanks液、DMEM培養基(含10％小牛血清)、0. 25％胰蛋白酶消化液、吉姆薩染液

實驗步驟

(1)消化：用0．25％胰蛋白酶溶液消化處于對數生長期的單層培養細胞，收集消化的細胞于10 ml離心管中。

(2)離心：500～1000r／min離心5min，棄上清。

(3)加入DMEM培養基(含10％小牛血清)，制備單細胞懸液。

(4)計數：吹打均勻后對細胞進行計數。

(5)按2×104～5×104個／ml的ATCC細胞密度接種在24孔培養孔板內。

(6)每天用胰蛋白酶溶液對其中3孔細胞進行消化，鏡下計數。

(7)計算3孔培養細胞數的平均值(細胞數／ml)。

(8)連續7天按上述方法消化3孔細胞并進行計數，算平均值。

(9)以培養時間作為橫坐標、細胞數為縱坐標，在半對數坐標紙上，將各點連成曲線，即可獲得細胞的生長曲線(圖5-1)。

結果分析

培養細胞的生長曲線在正常情況下通常呈s形，觀察曲線可發現，培養初期(1～2天)的細胞數約呈下降趨勢，這段時期即為細胞滯留期(潛伏期)。滯留期之后的3～5天，細胞數增加顯著，呈對數增長的趨勢，此時細胞進入了對數生長期。當對數生長期細胞數達到高峰，細胞生長逐漸停止，細胞數量進入穩定狀態，此時即為平臺期(平頂期)。

注意事項

在進行生長曲線的測定時，接種到培養板孔中的細胞數量應保持每孔一致。接種量應適當，不能過少或過多，過少將使細胞生長周期延長，過多將導致細胞在實驗未完成前即需傳代，這兩種情況下所得到的生長曲線均不能較準確地反應ATCC細胞的生長狀況。