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當前位置:首頁技術文章ATCC細胞培養的具體過程

ATCC細胞培養的具體過程

更新時間:2017-09-19點擊次數:508

一、ATCC細胞準備工作
準備工作對開展細胞培養異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試。
二、取材
在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養稱為原代培養。
理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養,實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養,分化程度低的組織比分化高的容易培養,腫瘤組織比正常組織容易培養。取材后應立即處理,盡快培養,因故不能馬上培養時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養
將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養基。如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示)接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察的內容包括細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。
一般原代培養進入培養后有一段潛伏期(數小時到數十天不等),在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養,將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質,也可能僅有不死性(Immortality)而無惡性。 培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。
四、凍存及復蘇
為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型ATCC細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,zui終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。
Multi-class antibodies    Anti-PCNA-Proliferation Marker  增殖細胞核抗原抗體    規格:     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-TFAR19/PDCD5  凋亡相關蛋白TFAR19抗體    規格:     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PCNA-Proliferation Marker  增殖細胞核抗原抗體    規格:     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-phosphos-PCNA (Tyr211)   磷酸化增殖細胞核抗原抗體    規格:     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PCX/PODXL  足細胞特異蛋白抗體    規格:     0.2ml
Multi-class antibodies    Anti-PDE4D  磷酸二酯酶4D抗體    規格:     0.2ml
Multi-class antibodies    Anti-PD-1/CD279  程序性死亡1抗體    規格:     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PDEF  上皮特異性ETs轉錄因子抗體    規格:     0.2ml
Multi-class antibodies    Anti-PDGF-A  血小板源性生長因子-A抗體    規格:     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PDGF-B  血小板源性生長因子-B抗體    規格:     0.1ml
ATCC細胞

 

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