ELISA試劑盒背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）
1 洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染。
2 底物污染，未避光保存，出現顏色棄去底物，重新配置
3 樣品稀釋液污染棄去稀釋液，重新配置
4 吸頭重復使用，未洗凈或消毒不*吸頭盡可能一次性使用
5 不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間）為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。*按照說明書要求。
6 偶聯抗體（streptavidin-HRP）濃度過高按照說明書調整到合適的濃度
7 ELISA板子不正確的貯存酶標板貯存于2-8 ℃；使用結合力低點的Elisa板
8 沒有正確封閉在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間
9 樣本溶血嚴重建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴重溶血樣本會導致背景偏高。