人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞；NCI-H295R圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞；NCI-H295R圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞系源于多能腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系NCI-H295，后者由Gazdar AF等建立，從腎上腺皮質(zhì)的腫瘤中分離而來。NCI-H295細(xì)胞經(jīng)改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細(xì)胞，群體倍增時(shí)間從原來的5天減為2天。NCI-295細(xì)胞懸浮生長，而NCI-H295R呈單層貼壁生長。NCI-H295R細(xì)胞保留了產(chǎn)生雄激素的能力，對(duì)血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應(yīng)。 
培養(yǎng)條件  DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  Nu-Serum I, 2.5%；15 mM HEPES＋0.00625 mg/ml insulin＋0.00625 mg/ml transferrin＋6.25 ng/ml selenium＋1.25 mg/ml bovine serum albumin＋0.00535 mg/ml linoleic acid
傳代方法  1:3~1:4傳代；每周換液2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X；CSF1PO：10，12；D13S317：13；D16S539：11；D18S51：17；D19S433：13；D21S11：32.2；D2S1338：25；D3S1358：15，16；D5S818：12；D7S820：9，12；D8S1179：13；FGA：19.2，24；TH01：9.3；TPOX：8；vWA：17，18；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

黃嘌呤氧化酶5u
非變性蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)25mg
CAS5704-04-1N- 三 ( 羥甲基 ) 甲基甘氨酸10g
131108-1ONPG 干粉1g
β-D- 阿糖胞苷50mg
MEQ，(6- 甲氧 -N- 乙基喹啉碘 )100mg
1，3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷5g
抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基測試盒 ( 比色法 )50 T
酸洗玻璃珠系列10g
131288-250Maximov 固定液250 mL
81103-25一站式真菌 mRNAout25 次
檸檬酸 ( 無水 )100g
Ac-IETD-FMK(Caspase8Inhibitor)20μL
Indo-1，五銨鹽1mgGlyoxylic acid monohydrate乙酸水合物563-96-2
Sodium dehydroacetate脫氫醋酸4418-26-2
KASUGAMYCIN HYDROCHLORIDE HYDRATE春雷霉素酸19408-46-9
D-Phenylalanine methyl ester hydrochlorideD-丙氨酸酯酸13033-84-6
COPPER(II) HEXAFLUOROACETYLACETONATE HYDRATE, 98雙(六乙酰丙)合銅(II)水合物155640-85-0
2-BROMO-5-METHOXYANILINE2-溴-5-氧基胺59557-92-5
Sodium 1-octanesulfonate1-烷磺酸5324-84-5
Furfuryl thioacetate乙酸糠硫醇酯13678-68-7
5-BROMO-4-CHLORO-3-INDOLYL B-D-5-溴-4--3-吲哚基-BETA-D-葡糖苷酸環(huán)己胺114162-64-0
2,6-Difluoroaniline2,6-5509-65-9
1-PHENOLPHTHALEIN1-酚酞
2-Amino-4-chlorobenzoic acid2-氨基-4-酸89-77-0
4-N-PROPOXYBENZALDEHYDE4-丙氧基5736-85-6
Hydroxyurea羥基脲127-07-1
2,2'-Biquinoline2,2'-聯(lián)喹啉119-91-5
NA3%化胰胳胨大豆瓊脂
2-Azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-3-one2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚-5--3-49805-30-3
環(huán)狀 DNA 全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次
22-0430-10Lucigenin( 光澤精 )10mg
90901-200菌體內(nèi)毒素清除劑200mL