小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；NIH/3T3價(jià)格質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；NIH/3T3價(jià)格操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  NIH/3T3是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細(xì)胞株。為了培育在形態(tài)學(xué)特征上更適合于進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析的亞株，建立的NIH/3T3細(xì)胞株又進(jìn)行了5輪以上亞克隆。該細(xì)胞株對(duì)肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對(duì)DNA轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)染研究十分有用。鼠痘病毒陰性。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C84
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR  STR鑒定
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

Cycloheximide （1 g）4-[（2R）-2-[（1S，3S，5S）-3，5-dimethyl-2-oxocyclohexyl]-2-hydroxyethyl]-2，6-piperidinedione； Naramycin A|NSC 185； Cycloheximide
Memantine （hydrochloride） （100 mg）3，5-dimethyl-tricyclo[3。3。1。13，7]decan-1-amine， monohydrochloride； Akatinol|Axura|Ebix|NSC 102290|Namenda|SUN Y7017； Memantine （hydrochloride）
StemRegenin 1 （hydrochloride） （10 mg）4-（2-（（2-（benzo[b]thiophen-3-yl）-9-isopropyl-9H-purin-6-yl）amino）ethyl）phenol， monohydrochloride； SR1； StemRegenin 1 （hydrochloride）
Spectinomycin （hydrochloride hydrate） （10 g）（5aR，9aR，10aS）-decahydro-4aR，7S，9S-trihydroxy-2R-methyl-6S，8R-bis（methylamino）-4H-pyrano[3-b][1，4]benzodioxin-4-one， dihydrochloride pentahydrate； Spectinomycin （hydrochloride hydrate）
JWH 398 N-（5-hydroxypentyl） metabolite-d5 （100 ug）（4-chloronaphthalen-1-yl）（1-（5-hydroxypentyl）-1H-indol-3-yl-2，4，5，6，7-d5）methanone； JWH 398 N-（5-hydroxypentyl） metabolite-d5
Rifampicin （1 g）3-[[（4-methyl-1-piperazinyl）imino]methyl]-rifamycin； NIH 10782|NSC 113926|Rifampin； Rifampicin
Ac-DEVD-CMK （1 mg）N-acetyl-L-α-aspartyl-L-α-glutamyl-N-[（1S）-1-（carboxymethyl）-3-chloro-2-oxopropyl]-L-valinamide； Ac-Asp-Glu-Val-Asp-CMK|Caspase-3 Inhibitor III； Ac-DEVD-CMK
PB-22 5-hydroxyquinoline isomer （5 mg）quinolin-5-yl 1-pentyl-1H-indole-3-carboxylate； PB-22 5-hydroxyquinoline isomer
PB-22 7-hydroxyisoquinoline isomer （1 mg）isoquinolin-7-yl 1-pentyl-1H-indole-3-carboxylate； PB-22 7-hydroxyisoquinoline isomer
Acetyl * （hydrochloride） （10 mg）*[1-（2-phenylethyl）-4-piperidinyl]-acetamide， monohydrochloride； Desmethyl *|MCV 4848|NIH 10485； Acetyl * （hydrochloride）
CYM 50308 （1 mg）（2Z，5Z）-5-[[1-（2，4-difluorophenyl）-2，5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl]methylene]-2-[（2-methoxyethyl）imino]-3-methyl-4-thiazolidinone； CID-49835928|ML-248； CYM 50308131083-20天凈沙 Ribo-SPIA cDNA 擴(kuò)增試劑盒20 次
微型離心管研磨杵 ( 無(wú)離心管 ) 50 只
Hoechst33342 干粉10mg
5- 溴 -2'- 脫氧尿苷100mg
DMEM( 低糖 )10L
CAS69-89-6黃嘌呤1g
21-0070-5 骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
91102-50柱式骨骼 DNAout50 次
RecA 蛋白1000μg 
DEAE 瓊脂糖凝膠 6B25mL
96 孔板病毒 DNAout( 離心法 )5次
核酸內(nèi)切酶 III (Nth)1000U
CAS64431-96-51，3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷5g
12-269KM71 酵母菌種1mL
一氧化氮檢測(cè)試劑盒 ( 硝酸還原酶法 )25 T
克必隆 eTS cDNA 文庫(kù)構(gòu)建試劑盒1套
透明質(zhì)酸100mg
IMDM 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )500mL
DNA ，pH5.2，3M 100mL
131229-10一站式生物素 TUNEL 試劑盒 (FITC/POD)10 次
90602A-50DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)λDNA/HindIII50 次
生物素化山羊抗親和素0.5mg