雜交瘤細(xì)胞株；DS2D3說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株；DS2D3說明書
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Rabbit Anti-chicken IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗雞IgG規(guī)格: 0.3ml
GDIA2/ARHGDIB  瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體規(guī)格: 0.1ml
NIPA  間變性淋巴瘤激酶核相互作用伴侶蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgG規(guī)格: 0.1ml
ETK/BMX  非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體規(guī)格: 0.1ml
CCDC75  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體規(guī)格: 0.2ml
Mouse anti-Goat IgG ascites  小鼠抗羊IgG腹水規(guī)格: 1ml
DKK1  抑蛋白DKK1抗體規(guī)格: 0.2ml
POC5  細(xì)胞中心粒蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
*mt  線粒體DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗體規(guī)格: 0.1ml
GTPBP10/Claudin12  緊密連接蛋白12抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF36  環(huán)指蛋白36抗體規(guī)格: 0.2ml
SMURF2  Smad蛋白E3泛素連接酶2抗體規(guī)格: 0.2ml
ACBD6  酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體規(guī)格: 0.2ml
MMP-9  基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體規(guī)格: 0.1ml
GGT6  γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶6抗體規(guī)格: 0.2ml
p70 S6 kinase beta  核糖體蛋白S6激酶1抗體規(guī)格: 0.2ml
MCP-2/CCL8  單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(小鼠)規(guī)格: 0.1ml
C2orf29  2號染色體開放閱讀框29抗體規(guī)格: 0.2mlZ-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)    1mg    23-0840-1
分枝桿菌 DNAout    50 次    70702-50
1mL        Rosetta 菌種
48 T        超氧化物歧化酶測試盒
100mL        DEPC 水
200mL        大鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液 1.066
超氧化物歧化酶測試盒    48 T    18-0210-48
DNA  Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 )    100g    101218-100
5g        噻孢
50 次        DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)λDNA/EcoR I
10mL        RNA 洗脫液
1mL        TH1 菌種
Red-KOD DNA 聚合酶    250U    130838-250
DNA PAGE 膠回收試劑盒    30 次    70908-30
5次        隨機(jī)引物法 DNA 探針生物素標(biāo)記試劑盒
50 次        單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)
100mL        Western 印跡膜封膜液 (NC 膜和 PVDF 膜 ) 
30μL        GAPDH 小鼠單抗
人源脫嘌呤 / 脫嘧啶 (AP) 核酸內(nèi)切酶激酶    1000U    130634-1000
MgSO4溶液，10mM，PCR     5mL    130840-5
80 次        天凈沙單細(xì)胞 RNA 擴(kuò)增試劑盒