中國倉鼠卵巢細胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 中國倉鼠卵巢細胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A說明書
形態特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  CHO-HCV-NS5A細胞整合有丙型肝炎病毒的NS5A基因，能穩定表達NS5A蛋白，是HCV基礎研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構建并保存。 
培養條件  DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C19
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權限 A類

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

天門冬氨酸洛美沙星    分子式：    484.453    分子量：     C17H19F2N3O3.C4    英文名稱：    Lomefloxacin aspartate    CAS號：    211690-33-4    
 雙酚AF    分子式：    336.23    分子量：     C15H10F6O2    英文名稱：    Bisphenol AF    CAS號：    1478-61-1    
 溴甲酚綠    分子式：    698.01    分子量：     C21H14Br4O5S    英文名稱：    Bromocresol green    CAS號：    76-60-8    
 酚酞    分子式：    318.33    分子量：     C20H14O4    英文名稱：    Phenolphthalein    CAS號：    77-09-8-    
 分散橙 1    分子式：    318.33    分子量：     C18H14N4O2    英文名稱：    Disperse orange 1    CAS號：    2581-69-3    
 堿性品紅    分子式：    337.85    分子量：     C20H20ClN3    英文名稱：    Fuchsin    CAS號：    632-99-5    
 二十八酸    分子式：    424.74    分子量：     C28H56O2    英文名稱：    Twenty-eight acid    CAS號：    506-48-9    
 2,3-二氯丙烯    分子式：    110.97    分子量：     C3H4Cl2    英文名稱：    2,3- two chloride    CAS號：    78-88-6    
 己烷雌酚    分子式：    270.37    分子量：     C18H22O2    英文名稱：    Hexoestrol    CAS號：    84-16-2    
 環黃芪醇    分子式：    490.71    分子量：     C30H50O5    英文名稱：    Ring of Astragalus    CAS號：    84605-18-5    
 曲安西龍    分子式：    434.5    分子量：     C24H31FO6    英文名稱：    Qu Anxilong    CAS號：    124-94-7    
 加巴噴丁鹽酸鹽    分子式：    207.7    分子量：     C9H18ClNO2    英文名稱：    Gabapentin hydrochloride    CAS號：    60142-96-3  人白細胞分離液 1.078    120906-200    200mL
柱式酵母質粒 DNAout    70202-50    50 次
250U    熱啟動 Tth DNA 聚合酶    
50 次    磁珠血液 DNAout    
30 次    一管式 DNA 膠回收試劑盒    
200mL    小鼠內皮細胞分離液 1.071    
活性氧檢測試劑盒    18-0380-100    100 次
RNA 電泳液 ,10×    3150-100    100mL
100μL    山羊抗兔 IgG(H+L)，辣根過氧化物酶標記    
100g    DNA  Guanidine HCl( 鹽酸胍 )    
250mL    非凍型細 RNA 保存液    
1mL    TG1 種    
Therminator II DNA 聚合酶    131196-100    100U
電泳甘油    90503-100    100mL
200U    T4 DNA 連接酶    
1mL    蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2    
0.1mL×10    HB101 化學感受態細胞    
1000μL    小鼠抗 V5 標簽單抗    
Xa 因子蛋白酶    120507-25    25μg
dATP 溶液，100mM    120615-0.5    0.5mL
500g    鐵氰化