培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    TM4 (正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞) (種屬鑒定正確)
別稱 TM-4

種屬 小鼠

年齡（性別） 11-13日齡

組織來(lái)源

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

背景描述 TM4細(xì)胞在FSH的作用下cAMP產(chǎn)量增加，但對(duì)LH無(wú)反應(yīng)；TM4細(xì)胞與原代Sertoli細(xì)胞相比，對(duì)FSH的反應(yīng)性降低。據(jù)報(bào)道，TM4細(xì)胞組成性纖溶酶原激活物的產(chǎn)量很低，但可被FSH刺激產(chǎn)生，受維甲酸刺激可有大幅增高。TM4細(xì)胞可產(chǎn)生視黃醇結(jié)合蛋白、組織纖溶酶原激活物和轉(zhuǎn)鐵蛋白；TM4細(xì)胞表達(dá)FSH受體、雄激素受體和孕激素受體；鼠痘病毒陰性。

生物安全等級(jí) 1

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM/F12＋5% HS＋2.5% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性 No, The cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice, but did form colonies in semisolid medium.

基因表達(dá)情況 retinol binding protein, tissue plasminogen activator, transferrin

注意事項(xiàng) 該細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔；換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正常現(xiàn)象，請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1715 BCRC; 60254 ECACC; 88111401

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次  動(dòng)物 DNAout100mL

石蠟包埋組織全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次  動(dòng)態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒1.7mL×10 支

單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次  動(dòng)態(tài)顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒48 次

環(huán)狀 DNA 全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次  定影粉1袋

通用型 LAMP 試劑盒50 次  凋亡 DNAout24 次
大鼠ICAM-1elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠IgEelisa檢測(cè)試劑盒

大鼠III型前膠原肽（PIIINP）elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠IV型前膠原肽（PIVNP）elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠I型前膠原羧基端肽（PICP）elisa檢測(cè)試劑盒
TM4 (正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞)大鼠血管緊張素Ⅱ受體1(AGTR1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠血管緊張素Ⅱ受體1(AT1R)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠血管緊張素Ⅱ受體1(AT1R)抗體elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠血管緊張素Ⅱ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅡ)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠血管緊張素II（ANG II）elisa檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。