培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產品屬性：

名稱    皮膚肥大細胞
2.組織來源：皮膚組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

人皮膚肥大細胞分離自皮膚組織；皮膚肥大細胞廣泛分布于皮膚微血管周圍，分泌多種細胞因子，參與免疫調節（T細胞、B細胞、APC細胞活化）。皮膚肥大細胞表達MHC分子、B7分子，具有APC功能。表達大量的IgE-Fc受體，釋放過敏介質。具有弱吞噬功能，和血液的嗜堿粒細胞同樣，具有強嗜堿性顆粒的組織細胞。存在于血液中的這類顆粒，含有肝素、組織胺、5-羥色胺，由細胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質，可在組織內引起速發型過敏反應（炎癥）。由于在肥大細胞上結合的IgE抗體和抗原的接觸，使細胞多陷于崩壞。肥大細胞呈圓形或卵圓形，細胞核小，呈圓形或橢圓形，染色淺，位于細胞中央。細胞常成堆或單個分布于血管附近。細胞呈圓形或卵圓形，細胞質中充滿大小一致、染成藍紫色的顆粒，均勻分布在核周圍。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人皮膚肥大細胞采用膠原酶-混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的人皮膚肥大細胞經MCG-35免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
硫乙醇酸鹽平板培養基70mm   熏衣草灰鏈霉菌

弗氏檸檬酸桿菌   木糖氧化產堿菌木糖氧化亞種

豇豆慢生根瘤菌   膠紅酵母

新月彎孢霉   粉狀畢赤酵母

糞腸球菌   熒光假單胞菌  無機0細菌
大鼠天門冬氨基轉移酶(AST)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)elisa檢測試劑盒

大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)elisa檢測試劑盒

大鼠糖原磷酸化酶(GP)elisa檢測試劑盒

大鼠糖原合成酶激酶3α(GSK3A)elisa檢測試劑盒免費代測
皮膚肥大細胞人表達于SiSo細胞系的受體結合型腫瘤抗原(RCAS1)elisa分析檢測試劑盒

人表達于SiSo細胞系的受體結合型腫瘤抗原(RCAS1)elisa檢測試劑盒

人表睪酮elisa分析檢測試劑盒

人表睪酮elisa檢測試劑盒

人表皮生長因子(EGF)elisa分析檢測試劑盒

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。