蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內容：純化好的目標蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽（Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產品屬性：

英文名稱：Recombinant Phosphoinositide-3-Kinase Class 3 (PIK3C3)

Vps34; Phosphatidylinositol 3-kinase p100 subunit; Phosphatidylinositol 3-kinase catalytic subunit type 3

型號：GOY-01D2168

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：n/a

預測分子量：32.9kDa

實際分子量：33kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Tyr631~Trp885 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：6.6

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關產品：

X-連鎖蛋白激酶(PRKX)重組蛋白英文名稱：Recombinant Protein Kinase, X-Linked (PRKX)PKX1; cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit PRKX物種：Rat，大鼠

脫氧胸苷酸激酶(DTYMK)重組蛋白英文名稱：Recombinant Deoxythymidylate Kinase (DTYMK)CDC8; TMPK; TYMK; Thymidylate Kinase; dTMP Kinase物種：Mouse，小鼠

基質金屬15(MMP15)重組蛋白英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 15 (MMP15)SMCP-2; MTMMP2; MT2-MMP; Membrane-Inserted; Membrane-type matrix metalloproteinase 2; Membrane-type-2 matrix metalloproteinase物種：Pig

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

公司正在出售的產品：

鏈霉菌 Streptomyces sp.NRK(大鼠腎細胞)

D-(-)-泛酰內酯  質量規(guī)格：>99% D-(-)-Pantolactone

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雄二 質量規(guī)格：≥99%,BR 4-Androstene-3,17-dione

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鹽丁咯地爾(標準品) 質量規(guī)格：HPLC>99%,標準品 Buflomedil HCl

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雄二（標準品） 質量規(guī)格：分析標準品,≥99% 4-Androstene-3,17-dione

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維生素E琥珀酯;D-α-生育酚琥珀酯 質量規(guī)格：>95%,BR Vitamin E succinate

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