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轉化細胞之間的共性
2018
4-271.所有的轉化細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質及糖被構成的生物膜，即細胞膜。2.所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。3.作為遺傳信息復制與轉錄的載體。4.作為蛋白質合成的機器─核糖體，毫無例外地存在于一切細胞內。核糖體，是蛋白質合成的必須機器，在細胞遺傳信息流的傳遞中起著*的作用。5.基本上所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。（少數不是，如藍藻的有些種類從老細胞內產生新細胞）6.部分細胞能進行自我增殖和遺傳（高度分化的細胞無法自我增殖。）7.新陳代謝。8....+ -
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干細胞測序技術的關鍵
2018
4-25對干細胞進行單個分離、研究、和比較有助于細胞異質性和基因組不穩定研究。zui常見的單細胞測序應用是在腫瘤研究領域。哈佛大學終身教授、美國科學院院士謝曉亮教授是單細胞測序其中一種技術路線的人。2015年謝教授課題組在單細胞全基因測序研究領域曾取得重要進展，利用“eWGA”擴增方法，大幅提高了擴增的均勻性和準確性，可同時檢測出單細胞中的小片段拷貝數變異和高精度的單核苷酸變異，該方法還具有基因組的高覆蓋率，有效降低外源污染。這是一項經過改良的單細胞全基因組擴增（whole-geno...+ -
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干細胞定期檢測很重要
2018
4-23即使實驗室沒有新來的干細胞，支原體也可能通過操作人員傳遞到現有的培養物。當然，操作人員并不知道。支原體污染的另一條路線是通過你的細胞培養試劑。培養基、酶這些常用試劑，也有可能被支原體污染。盡管無法*避免人或試劑的污染，但常規檢測也能避免情況惡化。也許，當支原體初次感染時，我們未必能檢測到，但盡早發現，就能防止這種微生物的傳播，避免大的損失。支原體檢測有很多種。直接培養方法雖然準確率高，但需要三到四周的時間。因此，我們在常規檢測中使用間接檢測方法已足夠，若發現陽性，則后續可采用...+ -
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熒光染料對ATCC細胞染色的觀察
2018
4-20ATCC細胞吖啶橙熒光染色的觀察：吖啶橙是zui經典的靈敏的熒光染料，它可對細胞中的DNA和RNA同時染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。1．將生長有培養細胞的玻片或雞血涂片放入95%乙醇中固定15—30分鐘，干燥；2．在1%醋酸中酸化30秒；3．在標本片上滴加足量的0．01%吖啶橙磷酸緩沖染液，染色5-10分鐘；4．用pH4．8磷酸緩沖液洗1分鐘；5．0.1mol／L氯化鈣分化30秒或幾分鐘；6．PBS漂洗三次，每次數秒鐘；7．在干凈載玻片上滴—...+ -
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ATCC細胞電融合方法
2018
4-181、儀2S結構和使用方法JCF-型ATCC細胞電融事儀的各項技術參數是通過大量的融合實驗數據，并參考島津公司(日)SSH型電融合裝置的參數值而設計的．當打開電源，指示燈亮，并撥通輸出開關和正弦輸出開關，選擇和按下正弦頻率按鍵(共分為0.6、0.8、1.3、1.5MHz五檔)，此時將輸出電纜與示波器相接，在示波器上即出現高頻正弦波形，當左右旋轉正弦幅度旋鈕，則正弦電壓的p-p值，也隨之降低和升高，如果將輸出電纜與電融合室相接，則細胸相互連接．此時再旋動正弦幅度(即正弦電壓)旋扭...+ -
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轉化細胞鋪勻的技巧
2018
4-16做轉化細胞實驗，細胞鋪板大概是zui常見的一個實驗了。但是有很多人不是很得要領，鋪得不是均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。以下是我的一些技巧，希望可以幫助到大家。1.一般96孔板我每孔是加100微升細胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細胞懸液混一下再，繼續加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不好），依次敲擊剩...+ -
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干細胞如何算是消化好了呢？
2018
4-13不是干細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是...+ -
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轉化細胞消化分離法
2018
4-11轉化細胞組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。1、酶消化分離法酶消化分離法常采用胰蛋白酶和膠原酶，其分離方法如下：（1）胰蛋白酶分散技術胰蛋白酶（簡稱胰酶）是廣泛應用的消化劑。胰蛋白酶是一種胰臟制品，對蛋白質有水介作用，主要...+ -
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如何才能在實驗室里獲得干細胞呢？
2018
4-9科學家可通過體外分離培養的方式得到干細胞。通過采用導入外源基因的方法使體細胞去分化為多能干細胞，對于這類干細胞我們稱之為誘導多能干細胞。2007年，日本科學家山中伸彌所在的團隊發明了誘導表皮細胞使之變身為多能干細胞的方法。此方法誘導出的干細胞可轉變為心肌和神經細胞，為研究治療多種心血管絕癥提供了巨大助力。這一方法被業界稱為“山中伸彌方法”，其研究成果免除了使用人體胚胎提取干細胞的倫理道德制約，因此在*被廣泛應用。山中伸彌團隊也憑此獲得了2012年的諾貝爾生理或醫學獎。然而，“...+ -
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ATCC細胞實驗復蘇細胞注意事項
2018
4-4以下分享的是復蘇ATCC細胞注意事項：1.收到細胞后當天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養基，放進培養箱，第二天再消化。2.邊觀察邊消化，根據細胞的形態，終止消化時間，采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化。客戶摸索好消化時間。3.隨細胞有一份細胞操作說明書，請客戶仔細查看。4.記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。5.售后時間為一周，于細胞本身的質量問題，而因乙方自己不當操作（不規范操作，消化過度，不加雙抗導致的污染等）導致的細胞問題...+ -
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干細胞取材的特殊要求及注意事項
2018
4-2*干細胞標本新鮮：一般在2h以內進行，超過2h，組織將有不同程度的自溶，其抗原或變性消失，或嚴重彌散。*取材部位：除取病灶或含待檢抗原部位外，還應取病灶與正常交界處，即所取組織切片中同時應有抗原陽性和陰性區，以形成自身對照。*-細胞壞死后，不僅抗原彌散或消失，而且常引起非特異著色，干擾觀察，因此取材時應盡可能避開壞死區。*避免擠壓：取材時組織受擠壓可使邊緣部細胞形態改變并加深非特異著色，因而取材時應使用鋒利的刀刃，鑷取組織動作要輕；經窺鏡直接鉗取的組織往往有過度擠壓，觀察結果...+ -
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腫瘤細胞消化法原代培養
2018
3-30Wistar大鼠處死，腫瘤細胞迅速取出胸主動脈，浸泡在含無菌PBS的表面皿中，轉移到無菌超凈臺。在表面皿中漂洗主動脈去除殘留的血跡，縱向剪開主動脈，把主動脈鋪平并使內膜朝上，用鑷子來回刮除內膜層，剝離血管中膜。將剝離的血管中膜用眼科剪剪碎，碎片大小在1mm×1mm左右。裝入含0.25%胰酶的玻璃培養瓶中于37℃條件下消化。當在顯微鏡下觀察組織塊表面出現大量細胞時應立即加入血清終止消化，一般消化的時間在3.5h。終止消化后將玻璃培養瓶置于37℃空氣搖床振搖10min，繼續用吹打...+
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