冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    小鼠小腸血管內皮細胞
2.組織來源：小腸組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠小腸血管內皮細胞分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內消化是至關重要的，因為食物經過小腸內胰液、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化后，基本上完成了消化過程，同時營養物質被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構成。其結構特點是管壁有環形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關系密切；構成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內分泌細胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細胞的收縮是負責腸蠕動的動力，促使食物向下運動。血管內皮細胞除了吞噬異物、細菌、壞死和衰老的組織等，還參與集體免疫活動，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）；③動脈硬化；④血管生成；⑤炎癥及腫脹（浮腫）；⑥內皮細胞亦控制一些物質，如白血球進出血管。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠小腸血管內皮細胞采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠小腸血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
即用型藍白 T 載體 B 型 (T7-T3, 有 MCS)20 次  沉淀法 miRNA 分離試劑盒50 次

即用型藍白 T 載體 C 型 (T7-T3，無 MCS)20 次  潮霉素 B 干粉250mg

即用型藍白 T 載體 D 型 ( 無啟動子，有 MCS)20 次  超敏型 BCA 法蛋白定量試劑盒500 次

即用型藍白 T 載體 E 型 ( 無啟動子，無 MCS)20 次  超螺旋 DNA 分子量標準100uL

可保種型藍白 T 載體50ng  超快核酸轉膜試劑盒5次
大鼠甲狀腺球蛋白(TG)elisa檢測試劑盒

大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)elisa檢測試劑盒

大鼠甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)elisa檢測試劑盒

大鼠甲狀旁腺激素(PTH)elisa檢測試劑盒

大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa檢測試劑盒
小鼠小腸血管內皮細胞人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)elisa檢測試劑盒免費代測

人15-羥基前列腺素脫氫酶(15-PGDH)elisa分析檢測試劑盒

人15-羥基前列腺素脫氫酶(15-PGDH)elisa檢測試劑盒

人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)elisa分析檢測試劑盒

人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。